f*****f
发帖数: 195 | 1 以前一直是bradford测浓度来保证loading一致。cell lysis buffer含NP40，DTT等。
两个样品A595差得比较远时比如0.4和0.1，线性不是很好，感觉定量不是很准。
另外，测A595（普通分光光度计）时，cell lysis加入到Bradford 1 min后测量和20
min后测量读数差别挺大的。
最近用nanodrop直接测A280同一个样品，不同时候测variation要比bradford小得多。
而且同一个样品，线性也挺好的，而且样品比较多的时候，比bradford方便。
根据A280来loading control，进而比较同一细胞系不同处理或比较不同细胞系有问题
么？你们平时一般用什么定量？谢谢。 |
V******t
发帖数: 444 | 2 楼主是280直接测吗
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e****s
发帖数: 1125 | 3 我觉得Braford好很多。A280对成分巨多的lysis buffer和混合蛋白不可能准确，个人
认为干扰因素较大。
Bradford的话，通常Cell lysate的浓度是很高的，会有几百倍的稀释，NP40,DTT等的
影响就不大了。每次同做Standard line的话，1 min 或者20 min的incubation time影
响就不大了。
【在 f*****f 的大作中提到】
: 以前一直是bradford测浓度来保证loading一致。cell lysis buffer含NP40，DTT等。
: 两个样品A595差得比较远时比如0.4和0.1，线性不是很好，感觉定量不是很准。
: 另外，测A595（普通分光光度计）时，cell lysis加入到Bradford 1 min后测量和20
: min后测量读数差别挺大的。
: 最近用nanodrop直接测A280同一个样品，不同时候测variation要比bradford小得多。
: 而且同一个样品，线性也挺好的，而且样品比较多的时候，比bradford方便。
: 根据A280来loading control，进而比较同一细胞系不同处理或比较不同细胞系有问题
: 么？你们平时一般用什么定量？谢谢。
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r*****t
发帖数: 4793 | |
a*******a
发帖数: 4233 | 5 没什么问题，我一直是10%sds裂了nano drop测一下。
如果是同样的样品，不同细胞或者组织之间比较，直接称重裂解就行了。
【在 f*****f 的大作中提到】
: 以前一直是bradford测浓度来保证loading一致。cell lysis buffer含NP40，DTT等。
: 两个样品A595差得比较远时比如0.4和0.1，线性不是很好，感觉定量不是很准。
: 另外，测A595（普通分光光度计）时，cell lysis加入到Bradford 1 min后测量和20
: min后测量读数差别挺大的。
: 最近用nanodrop直接测A280同一个样品，不同时候测variation要比bradford小得多。
: 而且同一个样品，线性也挺好的，而且样品比较多的时候，比bradford方便。
: 根据A280来loading control，进而比较同一细胞系不同处理或比较不同细胞系有问题
: 么？你们平时一般用什么定量？谢谢。
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f*****f
发帖数: 195 | 6 是直接测。
谢谢上面各位了：）
【在 V******t 的大作中提到】
: 楼主是280直接测吗
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x*****e
发帖数: 309 | |
