b**********8
发帖数: 349 | 1 又来请教各位大侠了，
我最近发现对一株细胞做某种处理后，一个基因（暂命名为A）的mRNA和protein都显著
下调，结果已经重复多次。现在推测这种处理因素可能会影响细胞株中A基因的转录，
于是构建了一系列逐渐缩短的启动子报告基因（基于pGL3-basic载体）和renilla载体
一起转染细胞。双荧光素酶报告基因分析发现从转录起始位点上游1000bp处开始，一直
到上游150bp，跟对照处理相比，处理组细胞的报告基因的活性一直都有显著下降。见
图A所示。但是当把所有组的报告基因活性都先被对照组pGL3-promoter的活性
normalise后，统计分析却显示到上游200bp时报告基因的活性就没有差异了。两张
figure都是在grapad prism里面用two way anova做的统计分析，结果却截然不同，这
关系到我接下来具体分析哪一个区域的问题，请大家帮我看看，到底哪一种统计方法更
合理？谢谢 |
C*********h
发帖数: 83 | 2 描述太混乱了。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 又来请教各位大侠了，
: 我最近发现对一株细胞做某种处理后，一个基因（暂命名为A）的mRNA和protein都显著
: 下调，结果已经重复多次。现在推测这种处理因素可能会影响细胞株中A基因的转录，
: 于是构建了一系列逐渐缩短的启动子报告基因（基于pGL3-basic载体）和renilla载体
: 一起转染细胞。双荧光素酶报告基因分析发现从转录起始位点上游1000bp处开始，一直
: 到上游150bp，跟对照处理相比，处理组细胞的报告基因的活性一直都有显著下降。见
: 图A所示。但是当把所有组的报告基因活性都先被对照组pGL3-promoter的活性
: normalise后，统计分析却显示到上游200bp时报告基因的活性就没有差异了。两张
: figure都是在grapad prism里面用two way anova做的统计分析，结果却截然不同，这
: 关系到我接下来具体分析哪一个区域的问题，请大家帮我看看，到底哪一种统计方法更
|
v*******e
发帖数: 11604 | 3 不是很了解你的领域，你得看看别人怎么做的，你那启动子报告基因的protocol怎么说
的。不太了解，只是觉得可能normalize之后的结果才是对的吧。 |
b**********8
发帖数: 349 | 4 不好意思，可能是我的表达能力不够，不过请大家耐心的看一下，然后参考我贴的示意
图，就能明白我的问题是什么了，谢谢！ |
v*******e
发帖数: 11604 | 5
你那图，大部分人都看不了吧。改成jpg吧。
【在 b**********8 的大作中提到】
: 不好意思，可能是我的表达能力不够，不过请大家耐心的看一下，然后参考我贴的示意
: 图，就能明白我的问题是什么了，谢谢！
|
m******5
发帖数: 1383 | 6 其实大多promoter reporter就是扯淡的
特别是proximal promoter.很多时候regulation明明在distal
enhancer上，还煞有介事地在proximal promoter上研究半天 |
