s******n
发帖数: 63 | 1 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠，是他自己做的，但是他说
只能用southern blot来鉴定杂合和纯和，因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
同源的序列，他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
但是我不想做Southern Blot啊啊啊，主要是要摸索，而且要花好多时间啊。。。
想问真的没有其他的办法了吗？ |
s******a
发帖数: 472 | 2 southern一般在ES克隆的时候就做了吧，后来PCR做genotyping就可以了。Southern不
会不PCR简单的。
【在 s******n 的大作中提到】
: 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠，是他自己做的，但是他说
: 只能用southern blot来鉴定杂合和纯和，因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
: 同源的序列，他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
: 但是我不想做Southern Blot啊啊啊，主要是要摸索，而且要花好多时间啊。。。
: 想问真的没有其他的办法了吗？
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n****3
发帖数: 543 | 3 PCR 是最简单的了，再多试试不同的引物组合。pcr产物也可以酶切看产物大小。good
luck |
b****r
发帖数: 17995 | 4 人都说了试了好久都不行，你就肯定比人家聪明？
做实验不要想着cut corner，southern也不是那么可怕的东西。实验有比什么都重要
good
【在 n****3 的大作中提到】
: PCR 是最简单的了，再多试试不同的引物组合。pcr产物也可以酶切看产物大小。good
: luck
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h********n
发帖数: 4079 | 5 设计一些taqman probe + primer
【在 s******n 的大作中提到】
: 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠，是他自己做的，但是他说
: 只能用southern blot来鉴定杂合和纯和，因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
: 同源的序列，他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
: 但是我不想做Southern Blot啊啊啊，主要是要摸索，而且要花好多时间啊。。。
: 想问真的没有其他的办法了吗？
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m******5
发帖数: 1383 | 6 不亲手试一下不甘心
【在 b****r 的大作中提到】
: 人都说了试了好久都不行，你就肯定比人家聪明？
: 做实验不要想着cut corner，southern也不是那么可怕的东西。实验有比什么都重要
:
: good
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l****b
发帖数: 400 | 7 请把这个KO模型的cloning strategy拿出来讲一讲，这样大家才好出谋划策啊。
【在 s******n 的大作中提到】
: 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠，是他自己做的，但是他说
: 只能用southern blot来鉴定杂合和纯和，因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
: 同源的序列，他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
: 但是我不想做Southern Blot啊啊啊，主要是要摸索，而且要花好多时间啊。。。
: 想问真的没有其他的办法了吗？
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r***e
发帖数: 2539 | 8 要不用roche的那个AP标记，做southern?
灵敏度比isotope略差，做genotyping应该够了，至少比较安全。
【在 s******n 的大作中提到】
: 实验室一个成为faculty的大大大师兄送给我们一种KO小鼠，是他自己做的，但是他说
: 只能用southern blot来鉴定杂合和纯和，因为敲掉的这个基因在基因组上有一些高度
: 同源的序列，他自己设计了15对引物都没有找到一个特异性好的........
: 但是我不想做Southern Blot啊啊啊，主要是要摸索，而且要花好多时间啊。。。
: 想问真的没有其他的办法了吗？
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m******5
发帖数: 1383 | 9 是啊大家看着都很好奇
【在 l****b 的大作中提到】
: 请把这个KO模型的cloning strategy拿出来讲一讲，这样大家才好出谋划策啊。
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