c********r
发帖数: 189 | 1 在用多抗的时候通常有很多带，如何区分杂带和isoforms呢，或者是蛋白剪切的产物。
多谢 |
n***w
发帖数: 2405 | 2 sample + 2nd --> result 1
sample + 1nd + 2nd --> result 2
compare the two? |
v***a
发帖数: 1242 | 3 我一般就是在文献里查，看大概的分子量判断主带。要么就是跑个含量很多的positive
control。
【在 c********r 的大作中提到】
: 在用多抗的时候通常有很多带，如何区分杂带和isoforms呢，或者是蛋白剪切的产物。
: 多谢
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m******5
发帖数: 1383 | 4 Use different antibody as reference
【在 c********r 的大作中提到】
: 在用多抗的时候通常有很多带，如何区分杂带和isoforms呢，或者是蛋白剪切的产物。
: 多谢
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s********s
发帖数: 67 | 5 质谱肯定能解决，就是得花钱。
【在 c********r 的大作中提到】
: 在用多抗的时候通常有很多带，如何区分杂带和isoforms呢，或者是蛋白剪切的产物。
: 多谢
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c********r
发帖数: 189 | 6
这样只能区分出2nd binding的杂带，如果primary也binding呢？
【在 n***w 的大作中提到】
: sample + 2nd --> result 1
: sample + 1nd + 2nd --> result 2
: compare the two?
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c********r
发帖数: 189 | 7
抗体有几个，对老鼠的这个蛋白，都不是很specific，哎
【在 m******5 的大作中提到】
: Use different antibody as reference
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c********r
发帖数: 189 | 8
positive
如果含量很多的话，比如transfected cell，肯定没问题，能检测到。但是如果是检测
endogenous蛋白的话，这个抗体就不好使了
【在 v***a 的大作中提到】
: 我一般就是在文献里查，看大概的分子量判断主带。要么就是跑个含量很多的positive
: control。
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c********r
发帖数: 189 | 9
就算是质谱，如何区分降解蛋白带和不同isoform带呢？
【在 s********s 的大作中提到】
: 质谱肯定能解决，就是得花钱。
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v***a
发帖数: 1242 | 10 是啊，那你可以对照在同一块胶上找到endogenous相应的band，它们应该是在同一水平
线的吧
【在 c********r 的大作中提到】
:
: 就算是质谱，如何区分降解蛋白带和不同isoform带呢？
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p********i
发帖数: 116 | 11 siRNA knock down 之后看看条带，当然首先得确认这个siRNA是有效的。有knockout的
组织更好，但是可能还不如质谱。 |
c*********r
发帖数: 1312 | 12 http://www.millipore.com/userguides/tech1/mcproto016
antigen preabsorption.不一定要用链接里说的合成的短肽，如果你的抗原是融合蛋白
的话，用它也可以，总之就是用纯抗原去饱和抗体后做western，看那些条带消失了。
我们自己做的抗体都需要这样验证。
【在 c********r 的大作中提到】
: 在用多抗的时候通常有很多带，如何区分杂带和isoforms呢，或者是蛋白剪切的产物。
: 多谢
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m******5
发帖数: 1383 | 13 你只能区分杂抗体，cross activity 或者moonlit activity还是区分不出来
【在 c*********r 的大作中提到】
: http://www.millipore.com/userguides/tech1/mcproto016
: antigen preabsorption.不一定要用链接里说的合成的短肽，如果你的抗原是融合蛋白
: 的话，用它也可以，总之就是用纯抗原去饱和抗体后做western，看那些条带消失了。
: 我们自己做的抗体都需要这样验证。
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