F******S
发帖数: 13 | 1 想让带GFP标签的蛋白只在胞浆里表达，用了MAPKK的NES序列ALQKKLEELELDE加在C端，
不管是1xNES 还是2xNES 都不见效果，折腾了要2个月了，现在准备换个GFP的质粒把
NES放到N端试试，不过也不抱太大希望。请问版上牛人哪位有这方面经验的，给个好用
的NES序列试试。小弟在此叩谢了！ |
m******5
发帖数: 1383 | 2 google几篇做beta-catenin NES fusion protein的文章，用那个NES序列大概能行
不过好奇楼主是怎么判断出NES 序列不行的？
单个GFP是自由穿梭的，从cytoplasmic-nuclear distruibution未必能很明显地看出区别 |
F******S
发帖数: 13 | 3 多谢楼上。我就是在普通荧光显微镜下看看， 因为我还有个C端NLS的GFP能很清楚的看
见GFP都在核里，现在换成NES却还是满细胞都是，和没加TAG的GFP一样，不知道是不是
需要用CONFOCAL才行。看了几篇文章都是从照片中就很清楚的看见GFP全都在胞浆里，
可是用他们的NES到我这里就没用了。
区别
【在 m******5 的大作中提到】
: google几篇做beta-catenin NES fusion protein的文章，用那个NES序列大概能行
: 不过好奇楼主是怎么判断出NES 序列不行的？
: 单个GFP是自由穿梭的，从cytoplasmic-nuclear distruibution未必能很明显地看出区别
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m******5
发帖数: 1383 | 4 你用的什么cell line? Hela好像特别容易进核，换NIH3T3或者293T试一下
不过楼主你做这个NES的目的是干嘛？ |
t****y
发帖数: 168 | 5 Check the paper:
Cytoplasm-localized SIRT1 enhances apoptosis
Journal of Cellular Physiology
Volume 213, Issue 1, pages 88–97, October 2007
【在 F******S 的大作中提到】
: 想让带GFP标签的蛋白只在胞浆里表达，用了MAPKK的NES序列ALQKKLEELELDE加在C端，
: 不管是1xNES 还是2xNES 都不见效果，折腾了要2个月了，现在准备换个GFP的质粒把
: NES放到N端试试，不过也不抱太大希望。请问版上牛人哪位有这方面经验的，给个好用
: 的NES序列试试。小弟在此叩谢了！
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F******S
发帖数: 13 | 6 我用的Hep3B， 转染效率挺高，一直用这个做的，看一个小肽对目的蛋白的影响并且看
在哪里作用的，前面NLS的数据挺好，数据都弄的差不多了，现在要个好的control,所
以准备用NES看下效果，结果NES这步耽搁了这么久。我觉得最好还是不换细胞系做了。
【在 m******5 的大作中提到】
: 你用的什么cell line? Hela好像特别容易进核，换NIH3T3或者293T试一下
: 不过楼主你做这个NES的目的是干嘛？
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