s******n
发帖数: 63 | 1 最近在做内源性的IP，用rabbit来源的抗体IP蛋白X，然后IB可能与X有相互作用的蛋白
Y，IB蛋白Y用的抗体是兔来源的，设置了rabbit IgG对照，并且收蛋白前加了几种处理
，假定是条件A、条件B、以及untreated, IB后曝光发现，条件B的样品在55kD处检测
到条带，A和Untreated以及IgG对照都没有，条带不像是重链那种黑乎乎的感觉，但是
分子量不太符合Y，在各种条件WB蛋白Y时它都出现在接近72kD处（这个是很确定的，因
为有缺陷小鼠和稳筛的细胞做对照）。做了两次都这样，IP的蛋白裂解液总蛋白量是一
致的，加的beads、抗体的量应该也没有差错。请问版上的同学们，检测的条带究竟是
重链呢，还是我的目的条带呢？如果是重链，好像应该A、B、Untreated、IgG无差异啊
，但是为什么分子量会和WB时不一样呢？要是比WB时的分子量大也就算了，居然还比WB
时小，真崩溃啊........ |
h******y
发帖数: 351 | 2 你做WB的二抗是什么？
WB
【在 s******n 的大作中提到】
: 最近在做内源性的IP，用rabbit来源的抗体IP蛋白X，然后IB可能与X有相互作用的蛋白
: Y，IB蛋白Y用的抗体是兔来源的，设置了rabbit IgG对照，并且收蛋白前加了几种处理
: ，假定是条件A、条件B、以及untreated, IB后曝光发现，条件B的样品在55kD处检测
: 到条带，A和Untreated以及IgG对照都没有，条带不像是重链那种黑乎乎的感觉，但是
: 分子量不太符合Y，在各种条件WB蛋白Y时它都出现在接近72kD处（这个是很确定的，因
: 为有缺陷小鼠和稳筛的细胞做对照）。做了两次都这样，IP的蛋白裂解液总蛋白量是一
: 致的，加的beads、抗体的量应该也没有差错。请问版上的同学们，检测的条带究竟是
: 重链呢，还是我的目的条带呢？如果是重链，好像应该A、B、Untreated、IgG无差异啊
: ，但是为什么分子量会和WB时不一样呢？要是比WB时的分子量大也就算了，居然还比WB
: 时小，真崩溃啊........
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s******n
发帖数: 63 | 3 就是CST的HRP-Goat啊，用来识别Goat IgG。本来想用Trueblot的Goat二抗，信号太弱
，就还是用了普通的Goat二抗 |
h******y
发帖数: 351 | 4 The best way is to get a new antibody if you suspect there is some non-
specific interaction.
【在 s******n 的大作中提到】
: 就是CST的HRP-Goat啊，用来识别Goat IgG。本来想用Trueblot的Goat二抗，信号太弱
: ，就还是用了普通的Goat二抗
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s******n
发帖数: 63 | 5 噢，谢谢。
可是这个抗体从来没出现过非特异啊........
【在 h******y 的大作中提到】
: The best way is to get a new antibody if you suspect there is some non-
: specific interaction.
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