L**********O
发帖数: 1761 | 1 我用HEK293T细胞，FIREFLY读数大概是２００００００，RENILLA读数大概是4００００
０。
但是我必须用osteoblast做实验。。FIREFLY读数大概是６０，RENILLA读数大概是２５
０。。
一开始怀疑是transfection的问题. 我用的是Lipofectamine。转染GFP以后，镜下观察
转染率大概50％。。
不知道该怎么改进了～～ |
V********n
发帖数: 305 | 2 感觉还是转染率的问题。镜下观察不准，一般会高估转染效率。可以转GFP过后，把细
胞弄下来跑flow。另，GFP一般是最容易转的，如果GFP转出来效率５０％，其他东西转的效率低个百分之１０－２０都很正常。 |
m*********7
发帖数: 5207 | 3 try nucleofection to improve transfection efficiency |
a********n
发帖数: 844 | 4 Transfection efficiency可能是问题，用你最终需要用的cell line测试各种
transfection reagent，比如Fugene HD
我问过公司里专门做transfection的人，说每个细胞系合适的reagent不同。 |
L**********O
发帖数: 1761 | 5 Do you mean amaxa? i tried~~~ but still bad~~~~~ :(((((
【在 m*********7 的大作中提到】
: try nucleofection to improve transfection efficiency
|
L**********O
发帖数: 1761 | 6 I tried 3 kits from amaxa nucleofection and lipofectamine.... But they are
all crap~~~~ :(((
【在 a********n 的大作中提到】
: Transfection efficiency可能是问题，用你最终需要用的cell line测试各种
: transfection reagent，比如Fugene HD
: 我问过公司里专门做transfection的人，说每个细胞系合适的reagent不同。
|
k****o
发帖数: 589 | 7
are
amaxa的GFP control转染效率如何？按理说应该很高的。另外试过不同的program吗？
【在 L**********O 的大作中提到】
: I tried 3 kits from amaxa nucleofection and lipofectamine.... But they are
: all crap~~~~ :(((
|
L**********O
发帖数: 1761 | 8 about 50-80%.. I tried three different programs...
【在 k****o 的大作中提到】
:
: are
: amaxa的GFP control转染效率如何？按理说应该很高的。另外试过不同的program吗？
|
k****o
发帖数: 589 | 9 按我的经验GFP的效率应该是大于80％。你的培养基里含有抗生素或者其它什么添加剂
吗？有时候那些会降低转染效率。 |
