F***w
发帖数: 58 | 1 请教:
如果用gene specific primer 做反转录，做real time PCR的时候，怎么设置内参照? |
c****1
发帖数: 1095 | 2 貌似没有办法了，因为你的cDNA里只有你的target。
我没有这样做过，但是你可以试试：在你用gene specific primer 做反转录的时候，
也加入你的内参primer，这样你就引入了内参。 |
S*****s
发帖数: 287 | 3 我有点好奇你这个实验设计，为什么要用 GSP 做反转录？和 Oligo dT 相比有什么优
势么？ |
o*****a
发帖数: 2335 | 4 比如俺们做microRNA的PCR就是用GSP......
【在 S*****s 的大作中提到】
: 我有点好奇你这个实验设计，为什么要用 GSP 做反转录？和 Oligo dT 相比有什么优
: 势么？
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Z******5
发帖数: 435 | 5 我就这么做的
Transition C19MC microRNAs are processed from introns of large Pol-II, non-
protein-coding transcripts
A Double-Negative Feedback Loop between ZEB1-SIP1 and the microRNA-200
Family Regulates Epithelial-Mesenchymal
参考这两篇文章，可以用第一篇文章中提到的GSP做第二篇文章中的Figure1C
至于要做定量，最好还是用random hexamers做反转录吧。 我试过random hexamers和
OligodT，结果都是一致的。
【在 o*****a 的大作中提到】
: 比如俺们做microRNA的PCR就是用GSP......
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S*****s
发帖数: 287 | 6 优势是什么？我只做过 realtime PCR 不做 microRNA。在我看如果用 oligodT 就可以
拿 GAPDH actin 之类的内参做 control，测出来的 specific level 也更准确一点。
【在 o*****a 的大作中提到】
: 比如俺们做microRNA的PCR就是用GSP......
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h****g
发帖数: 439 | 7 可以再单独逆转录一次，用内对照基因的gene specific primer 或者oligodT。用这个
cDNA 来PCR 内参。 |
