z****i
发帖数: 35 | 1 最近要筛选几个分子，请公司设计了siRNA，他们每个分子给设计三种siRNA，说保证至
少有一种有效，但是鉴定干扰效率发现有些最多只能达到40%，指导我的博后建议说要
不试一下选用两个siRNA，1:1混合转染，说这种cocktail式转染,效率会比较好，我知
道有些公司给设计的siRNA就是一个pool，效率比较好，可是我们这种自己制造的混合
物和人家公司的能一样吗？
哦，我们用的是polyplus的Interferin，一直都还挺好用，转染时siRNA的浓度是20nM
，应该问题不大，阳性对照的干扰效率是70%多。
对于提高腹腔巨噬的干扰效率，有经验的前辈们能不能说说你们的方法？
谢谢大家... |
s*******g
发帖数: 121 | 2 try transfection kit from Amaxa or shRNA in lentivirus.
20nM
【在 z****i 的大作中提到】
: 最近要筛选几个分子，请公司设计了siRNA，他们每个分子给设计三种siRNA，说保证至
: 少有一种有效，但是鉴定干扰效率发现有些最多只能达到40%，指导我的博后建议说要
: 不试一下选用两个siRNA，1:1混合转染，说这种cocktail式转染,效率会比较好，我知
: 道有些公司给设计的siRNA就是一个pool，效率比较好，可是我们这种自己制造的混合
: 物和人家公司的能一样吗？
: 哦，我们用的是polyplus的Interferin，一直都还挺好用，转染时siRNA的浓度是20nM
: ，应该问题不大，阳性对照的干扰效率是70%多。
: 对于提高腹腔巨噬的干扰效率，有经验的前辈们能不能说说你们的方法？
: 谢谢大家...
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w***a
发帖数: 4361 | 3 跟siRNA本身可能根本没关系，就是transfection效率低下的问题，
用cocktail的话引入更多off target。
这种primary cell本来就很难转化，你试试电转看怎么样。
20nM
【在 z****i 的大作中提到】
: 最近要筛选几个分子，请公司设计了siRNA，他们每个分子给设计三种siRNA，说保证至
: 少有一种有效，但是鉴定干扰效率发现有些最多只能达到40%，指导我的博后建议说要
: 不试一下选用两个siRNA，1:1混合转染，说这种cocktail式转染,效率会比较好，我知
: 道有些公司给设计的siRNA就是一个pool，效率比较好，可是我们这种自己制造的混合
: 物和人家公司的能一样吗？
: 哦，我们用的是polyplus的Interferin，一直都还挺好用，转染时siRNA的浓度是20nM
: ，应该问题不大，阳性对照的干扰效率是70%多。
: 对于提高腹腔巨噬的干扰效率，有经验的前辈们能不能说说你们的方法？
: 谢谢大家...
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W****C
发帖数: 1937 | 4 基本所有的macrophage transfection效率都很低 |
h*******n
发帖数: 2052 | |
a***e
发帖数: 1010 | 6 Cocktail (esiRNA) based silencing actually reduces the off-target effect,
since each single sequence has a much lower concentration.
【在 w***a 的大作中提到】
: 跟siRNA本身可能根本没关系，就是transfection效率低下的问题，
: 用cocktail的话引入更多off target。
: 这种primary cell本来就很难转化，你试试电转看怎么样。
:
: 20nM
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w***a
发帖数: 4361 | 7 Good to know that, hehe
I guess the common practice is to use cocktail to get stable knockdown
and phenotype and then try to identify the strong individual siRNA from
that pool which gives similar silencing and very low off-target as well.
【在 a***e 的大作中提到】
: Cocktail (esiRNA) based silencing actually reduces the off-target effect,
: since each single sequence has a much lower concentration.
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