D******9
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发帖数: 2665 | 4 Sorry, I need whole cell proteins. Need to do some western blot | S*****s
发帖数: 287 | 5 我用 15ml RIPA/1mg 脑组织，用 mortar 打碎，离心之后取上清，蛋白浓度一般在
4mg/ml 左右 (Bio-Rad Bradford assay)，做 western 检测膜蛋白效果不错，过程也
蛮简单。
【在 D******9 的大作中提到】
: Sorry, I need whole cell proteins. Need to do some western blot
| D******9
发帖数: 2665 | 6 do you freeze the sample in liquid nitrogen or -80 first? When you
homogenize the tissue, do you also add some liquid nitrogen into it? Thx | S*****s
发帖数: 287 | 7 我用的老鼠大脑是以前取下来 fresh frozen 的。这样的脑子既可以用来切片也可以用
来提蛋白或者 RNA。如果你有新鲜的大脑效果应该更好。如果你只是用来提蛋白可以把
冻好的脑组织放在加了 protease inhibitor 的 RIPA 里面解冻，然后在 RIPA 里面
homogenize。你说的那个加液氮粉碎组织的我也做过，不过是把组织粉碎之后提 RNA
用的，那个还要用专门的冷冻好的 mortar pestal，蛋白不需要这么苛刻的条件。 |
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