由买买提看人间百态

boards

本页内容为未名空间相应帖子的节选和存档,一周内的贴子最多显示50字,超过一周显示500字 访问原贴
Biology版 - [合集] 请问关于荧光染色
相关主题
为啥做个phalloidin染actin都做不出来[求助]questions for CMV enhancer
急问,组织染色问题免疫荧光 的 FITC 和 TRITC 染料相互有影响吗? (背景高假阳性)
acetone 固定对FITC-dextran有影响吗?fronzen section 的片子可以拿Fomailin 或者Paraphormahyde 固定吗?
YFP为啥是green的Confocal 三色荧光抗体的选择
从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记(三)关于共转染实验,请教版上高人!
包子问题,哪种启动子做稳定转染比较好?细胞免疫染色
有用pll3.7包装病毒做蛋白表达的吗?请教一个特异性抗体荧光标记细胞的问题
MEFs细胞表达启动子选择4种颜色的荧光显微镜
相关话题的讨论汇总
话题: 荧光话题: v5话题: pbs话题: icepiao
进入Biology版参与讨论
1 (共1页)
O******e
发帖数: 4845
1
☆─────────────────────────────────────☆
icepiao (icepiao) 于 (Sun Sep 17 00:44:40 2006) 提到:
我转染后利用Anti-V5-FITC进行荧光染色,买的是invitrogen的抗体,目的是看
plasmid transfection后一个protein的表达情况,V5是该蛋白的Fusion protein tag
,因此只要该protein表达,理论上V5应该也表达,基因的启动子是CMV启动子。
步骤为首先co-transfection,利用另外一个report plasmid看transfection
efficiency, 48小时后PBS洗两遍,利用100%甲醇固定5min,然后PBS洗5遍,2min每次,
加入含10%胎牛血清的PBS Block20分钟,然后加入荧光抗体,置暗处1h,然后荧光显微
镜下观察,但是在荧光显微镜下几乎什么也看不到,偶尔有几个有可能有荧光的细胞,
但是太少了。
随后我也采用了4% PFA fix 0.1%Triton x-100 permeabilize,
1 (共1页)
进入Biology版参与讨论
相关主题
4种颜色的荧光显微镜从纯化到星辰---CSH蛋白质纯化课侧记(三)
请问版上牛人:什么promoter在mouse astrocytes里面表达比较好啊?包子问题,哪种启动子做稳定转染比较好?
有做过DNA荧光标记的,譬如 dig-dUTP, biotin-dUTP有用pll3.7包装病毒做蛋白表达的吗?
做过组织切片免疫荧光的请进MEFs细胞表达启动子选择
为啥做个phalloidin染actin都做不出来[求助]questions for CMV enhancer
急问,组织染色问题免疫荧光 的 FITC 和 TRITC 染料相互有影响吗? (背景高假阳性)
acetone 固定对FITC-dextran有影响吗?fronzen section 的片子可以拿Fomailin 或者Paraphormahyde 固定吗?
YFP为啥是green的Confocal 三色荧光抗体的选择
相关话题的讨论汇总
话题: 荧光话题: v5话题: pbs话题: icepiao