a********x
发帖数: 94 | 1 不知道有没有人做过全细胞的elisa。就是用elisa做细胞裂解以后裂解液里面的蛋白。
我在想细胞裂解液是不是使1st ab失活，使得1st ab和target protein结合不完全？这
个问题怎么解决呢？
请达人指教。 |
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E*C
发帖数: 1629 | 2 如果检测细胞裂解液里面酶底物的情况，肯定在裂解过程中要加特异的抑制剂了。
现在我想检测外援底物，想把裂解液和外援底物作用，看酶活性。应该不需要加抑制剂
，对吧。
我是想说，如果处理过程中酶活化了，是不是不可避免的？ |
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k*********7
发帖数: 49 | 3 最近小弟我需要从较少细胞量（~1000）中提取genomic DNA，但是由于细胞量不多，始
终找不到很好的裂解提取的方法。
希望看到的高手可以教一下哈。
具体情况是这样的：材料是细胞，不是组织。不想使用kit，想自己配置一些裂解液，
比如tris-HCL，SDS，EDTA等，但是不清楚比例啊，加入裂解液后又该如何处理，比如
温度啊什么的。
求救啊，万分感谢，有知道的同学可以留言，也可以给我发邮件。
Thanks |
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H***e
发帖数: 223 | 4 周末用french pressure裂解细胞之后不能马上测酶活，需要等下一周去别的实验室用
超速离心机。我的问题是：
1. 我加等体积的50%甘油混合，然后保存在-80度冰箱可以么？如果这个方法不行，细
胞裂解液该如何保存呢？
2. 我关注的酶在细胞膜上，这样会有什么影响么？
3. 下周我需要用的时候直接解冻还是如何操作?
谢谢您的解答，非常感激。 |
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b******n
发帖数: 4225 | 5 【 以下文字转载自 Biology 讨论区 】
发信人: bulletin (bulletin), 信区: Biology
标 题: 关于HPLC上跑全细胞裂解液的问题
发信站: BBS 未名空间站 (Tue Apr 20 21:33:52 2010, 美东)
想分析一个全细胞裂解液中的某种酶活
通过HPLC检测酶催化降解的产物
不知道要注意什么事项，以免把柱子给堵住报废了
谢谢啦 |
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发帖数: 1 | 6 过去数十年的国际经贸整合趋势，从早期的关税暨贸易总协定(GATT)发展至1995年成立
世界贸易组织(WTO)，各种全球及区域的多边组织纷起形成的全球化浪潮，美国多扮演
主导角色；但这样的全球化氛围与共识，显然已在川普总统的主观认识下发生裂解与质
变。
川普自认改善美国贸易协定的简单策略，就是「分而征之(divide and conquer)」；川
普以「对美国不公平」为由，妖魔化几乎所有多边贸易协议，且片面宣称不再认帐，捨
弃多边协议，改就美国与个别国家的双边协议，以为这样就可以创造美国新机会。但经
济学者说，事实并非如此。
川普27日宣布美国与墨西哥达成修改「北美自由贸易协定」(NAFTA)协议，排除加拿大
并更名美墨贸易协定；市场乐见美墨达成协议，道琼工业平均指数27日劲扬259.29或1.
01%，以2万6049.64作收。
坏消息是，美墨协议将规范从墨国进口的汽车和零件，可能推高美国消费者的开销并复
甦美国汽车业。
好消息是，落实美墨协议困难重重，诸如双方得在墨国总统潘尼亚尼托(Enrique Pena
Nieto)11月卸任前签好，但众院势将反对，且墨国的总统当选人罗培兹欧... 阅读全帖 |
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t********y
发帖数: 6 | 7 当然也在4度下.
看文章多数是抗体+细胞裂解液两样摇过夜,第二天再上珠子,可我这样做拉不下蛋白.
如果三样同摇,条带倒有了,又怕是非特异.卖我抗体的说他们就这么做(摇三样过夜)没
问题,IgG也不会有条带,结果我这么做IgG对照又有条带!(不过我这个IgG质量也有些可
疑)
其他方法也在试,如果加大IP抗体的量吧,似乎珠子就有些凝聚成坨,似乎也加大非特异
的风险.
有没有人有经验指点一下,这么做行么?谢谢了 |
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b******n
发帖数: 4225 | 8 想分析一个全细胞裂解液中的某种酶活
通过HPLC检测酶催化降解的产物
不知道要注意什么事项，以免把柱子给堵住报废了
谢谢啦 |
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d*****a
发帖数: 53 | 9 在蛋白质裂解中，传统的方法是用溴化氰，但是毒性太大，容易污染环境，请问有没有
别的好方法？ 纠结中........... |
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s******y
发帖数: 28562 | 10 如果你不嫌麻烦的话可以用碱性裂解，75度，过夜。 |
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d*****a
发帖数: 53 | 11
碱性裂解好像不是专门针对蛋氨酸的，当时我设计的就是在蛋氨酸上进行酶切，多谢您
的指点 |
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r*********g
发帖数: 1160 | 12 谢谢回复，那在剧烈摇动时产生热量会不会denature protein。
我看了youtube的视频，理解为摇晃完放到冰上？
我想买50ml的adapter，那么裂解50ml的culture也只用40秒就可以了么？
如果有经验，求帮忙解答，先谢过了。 |
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i**********a
发帖数: 1402 | 13 50ml的40秒肯定不够，可以多做几个40秒，或者20秒，然后中间放冰上1分钟间隔。这
个要根据自己的实验来定，做个几次然后在显微镜下看裂解的细胞的百分比，然后就知
道大概怎么做了。 |
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H*g
发帖数: 2333 | 14 最近被这个困扰，不知道哪里出问题了。请教有没有遇到过突然Bugbuster不work, 大
肠杆菌完全裂解不了的情况？
Thanks! |
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g***s
发帖数: 30 | 15 最近实验室有人在做一个蛋白激酶，这个激酶是和cell adhesion有关，但是不是膜蛋
白，应该只是membrane associated。我们想IP这个蛋白，buffer是1% triton，后来还
加了点SDS。结果每次裂解后，发现离心后上清中蛋白非常少。也尝试过不同的PH，所
以应该也不是等电点沉淀的问题。不知道各位有遇到过类似的问题吗，有什么好的尝试
条件？非常感谢 |
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d****u
发帖数: 1553 | 16 这是一种可能，还有一种可能是你的蛋白和膜上的什么东东结合了才能保持构象稳定。
你把细胞裂解了可能导致了蛋白相互作用的破坏，间接破坏了蛋白的稳定性。 |
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e****s
发帖数: 1125 | 17 好像可以只加SDS来裂解细胞，
SDS在0.1%以下，对检测结果的干扰就不大了。一般测总蛋白，起码稀释100-500倍，
SDS浓度就不高了。跑胶的时候再和正常的Laemmi buffer混起来。
.8. |
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b******n
发帖数: 4225 | 18 谢谢你的帮助和指导
这是我想要的思路
我想检测全细胞裂解液中的某个酶活
然后过HPLC柱子来检测底物的产生
反应一段时间之后可以终止反应，
然后沉淀蛋白
但是对于什么方法沉淀比较好没把握
谢谢啦
.
your
column. |
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k*****a
发帖数: 7110 | 19 第七卷 蜘蛛篇 第三十三节 谜语
第七卷 蜘蛛篇 第三十三节 谜语
神堂只有正门这一个入口，此外没有门窗，两个全副武装的卫兵正守在正门两侧。
想要进去的话，倒也不那么容易。最便捷的方法是直接传送，但神堂作为一个“结点”
的所在，自然是有周密防护的，一系列的次元锚互相联结，封锁了神堂周围，阻隔自外
向内的传送，而琼恩没有能力解除这样密集嵌合的法术。除此之外，墙壁内层是用精金
融汁浇灌，这令穿墙术（Passwall）和索尔石行术也无法起作用，这两种法术都没办法
穿越金属。唯一的方法，就是从正门走进去，隐形魔法，或者精妙的变形，应该可以骗
过两个卫兵的眼睛。
“门上应该会有法术陷阱吧。”维康尼亚问。
琼恩凝神辨识了片刻，神殿正门上各种魔法灵线紧密的纠结在一起，彼此互相支援
，“有两道防御，”他说，“在正门前方有一个识破隐形和一个解除变形，我们撞上的
话伪装就会暴露，但没关系，卫兵已经来不及阻拦我们了。”
“后面那道防御呢？”
“我辨认不出效果，”琼恩说，随即又补充了一句，“但我基本可以断定它们都没
有攻击性，看不到危险的讯号。”
“没关系，就算有攻击性，我们也有这个。”维康尼亚说，扬了扬手，... 阅读全帖 |
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k*****a
发帖数: 7110 | 20 第七卷 蜘蛛篇 第三十三节 谜语
第七卷 蜘蛛篇 第三十三节 谜语
神堂只有正门这一个入口，此外没有门窗，两个全副武装的卫兵正守在正门两侧。
想要进去的话，倒也不那么容易。最便捷的方法是直接传送，但神堂作为一个“结点”
的所在，自然是有周密防护的，一系列的次元锚互相联结，封锁了神堂周围，阻隔自外
向内的传送，而琼恩没有能力解除这样密集嵌合的法术。除此之外，墙壁内层是用精金
融汁浇灌，这令穿墙术（Passwall）和索尔石行术也无法起作用，这两种法术都没办法
穿越金属。唯一的方法，就是从正门走进去，隐形魔法，或者精妙的变形，应该可以骗
过两个卫兵的眼睛。
“门上应该会有法术陷阱吧。”维康尼亚问。
琼恩凝神辨识了片刻，神殿正门上各种魔法灵线紧密的纠结在一起，彼此互相支援
，“有两道防御，”他说，“在正门前方有一个识破隐形和一个解除变形，我们撞上的
话伪装就会暴露，但没关系，卫兵已经来不及阻拦我们了。”
“后面那道防御呢？”
“我辨认不出效果，”琼恩说，随即又补充了一句，“但我基本可以断定它们都没
有攻击性，看不到危险的讯号。”
“没关系，就算有攻击性，我们也有这个。”维康尼亚说，扬了扬手，... 阅读全帖 |
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c*********d
发帖数: 9770 | 21 https://wxn.qq.com/cmsid/CUN2018112500807400
人民日报2018-11-25 19:25:02
原标题：泉港碳九泄漏：实际泄漏量69.1吨 瞒报为6.97吨
通报泉港化学品泄漏事故调查及处置情况
2018年11月25日
泉州市人民政府新闻办
4日起，泉港区陆续通报有关事故处置进展情况，8日起泉州市、泉港区均作了后续通报
。事故发生后，泉州成立由市安监会同环保、海洋渔业、公安、港口管理等部门组成，
并邀请监委、检察院等单位参加的事故联合调查组，对事故的性质和发生、经过、责任
进行深入调查。今天重点通报事故调查和后续处置情况。
一、通报泄漏事故发生经过的调查情况
经调查，2018年11月3日下午16时左右，宁波舟山通州船务有限公司“天桐1号”油轮（
以下简称“天桐1号”）靠泊东港石化公司码头，拟接运东港石化公司工业用裂解碳九
；晚上18时30分左右，岸上人员开始对东港石化码头输油管道进行裂解碳九装船作业的
准备工作。在码头吊机长期处于故障状态下，操作员违规操作，人工拖拽，用输油软管
把岸上和船舶联系起来，并用绳索固定软管；19时12分，后方油库通过... 阅读全帖 |
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k*****a
发帖数: 7110 | 22 第三卷 烛堡篇 第十八节 我想让你死掉
金发青年笑了起来。“难怪我远远地就觉得有种特别熟悉的感觉，”他说，手指抚摩着
盾牌的表面，“做工不错，”他夸奖着，仿佛在评价的根本就不是自己的鳞片似的，“
附魔……活化……唔，”他微微闭上眼睛，感受着，“还有虹彩图纹……咦？”
他惊讶了一声，不知发现了什么，转头朝琼恩看了一眼，“这盾牌是谁给你的……啊，
是你啊。”
当日在阴魂城，不过匆匆一面，琼恩后来知道对方是只虹彩龙，自然印象深刻；但这位
虹彩龙却不过当琼恩是个很普通的路人甲，哪里放在心上，总算他记忆力惊人，过目不
忘，居然又想了起来。
既然想起琼恩是谁，自然也就大体知道他的身份来历，这面龙鳞盾是谁给他的，答案也
就不言而喻了。金发青年并没有追问，也没有将盾牌还给琼恩，却也没有如琼恩预料中
那样发怒，“自我介绍一下，”他说，“我是瑞恩斯坦，”虹彩龙向洞中的三个人点了
点头，算是打招呼，“对了，这面盾牌能借我看看吗？”最后这句话是对琼恩说的。
琼恩难道还能拒绝么。
“出去再说吧，”自称瑞恩斯坦的虹彩龙说，依旧微笑着，他的眼光从三个人的脸上一
掠而过，在梅菲斯身上稍稍停留了一下，但也随即若无其事地... 阅读全帖 |
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k*****a
发帖数: 7110 | 23 第三卷 烛堡篇 第十八节 我想让你死掉
金发青年笑了起来。“难怪我远远地就觉得有种特别熟悉的感觉，”他说，手指抚摩着
盾牌的表面，“做工不错，”他夸奖着，仿佛在评价的根本就不是自己的鳞片似的，“
附魔……活化……唔，”他微微闭上眼睛，感受着，“还有虹彩图纹……咦？”
他惊讶了一声，不知发现了什么，转头朝琼恩看了一眼，“这盾牌是谁给你的……啊，
是你啊。”
当日在阴魂城，不过匆匆一面，琼恩后来知道对方是只虹彩龙，自然印象深刻；但这位
虹彩龙却不过当琼恩是个很普通的路人甲，哪里放在心上，总算他记忆力惊人，过目不
忘，居然又想了起来。
既然想起琼恩是谁，自然也就大体知道他的身份来历，这面龙鳞盾是谁给他的，答案也
就不言而喻了。金发青年并没有追问，也没有将盾牌还给琼恩，却也没有如琼恩预料中
那样发怒，“自我介绍一下，”他说，“我是瑞恩斯坦，”虹彩龙向洞中的三个人点了
点头，算是打招呼，“对了，这面盾牌能借我看看吗？”最后这句话是对琼恩说的。
琼恩难道还能拒绝么。
“出去再说吧，”自称瑞恩斯坦的虹彩龙说，依旧微笑着，他的眼光从三个人的脸上一
掠而过，在梅菲斯身上稍稍停留了一下，但也随即若无其事地... 阅读全帖 |
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s******y
发帖数: 28562 | 24 裂解的时候，先把细胞用dPBS洗一洗
既然你要跑总蛋白的胶，那何必用TCA沉淀呢？直接用8M Urea 裂解然后
直接上胶不更好么？这样还省得你操心phosphotase 的问题。
另外，如果你自己没有做过trpsin digestion, 不如让跑质谱的人帮你做算了。
他们一般都负责这一步的。你要自己做，万一没弄好还更麻烦。
最近要做一个质谱实验，目的是检测一个信号转导通路上的蛋白被抑制剂抑制（没有抑
制的作为对照组），病原体感染后某个器官的蛋白水平变化, 当然很希望能够看到磷酸
化蛋白的变化。
这个器官是单层细胞的，几个平方毫米大小（取50个左右的个体作为一个样品）；
我的初步实验步骤是：器官细胞在裂解液中裂解---沉淀蛋白--凝胶电泳蛋白---胶上用
胰蛋白酶分解蛋白并收集--MS 分析。
请教做过的朋友：
1）用什么溶液和方法来进行器官细胞裂解能够充分裂解细胞，又能够不影响后面的质
谱分析？
2）在裂解完细胞后，用氯仿甲醇沉淀的方法纯化蛋白两次，并除去裂解液中一些盐和
去垢剂；请问这步操作会不会造成蛋白降解，尤其是磷酸化基团的去磷酸化？
2）质谱一般的上样量为多少？ 每个样品... 阅读全帖 |
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W*********n
发帖数: 775 | 25 谢谢艳阳天！
和我们这边作质谱的老师交流，问他用什么样的裂解液最适合后面的LCMSMS分析，他说
“Since you’re running the samples on a gel before trypsin digest, don’t
worry about the buffers; use whatever you want. ” 然后我就把上面那封邮件发
给他，他回复“I don’t think urea is a good idea, since it will cause
problems for your gel (very difficult to totally remove). I would be
careful during your gel digest…make sure you do plenty of washes to remove
the protease inhibitors before the trypsin step. ”
我晕死了，他都说use whatever you want了，我找了大家认为很好的Urea方法，结果
他又说not... 阅读全帖 |
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T**********t
发帖数: 1604 | 26 我原来在版上发过帖子问过的：
http://www.mitbbs.com/article_t/Biology/31400349.html
你看看和你的culture长得像不像。
实验室表达蛋白用的大肠杆菌菌株都不是野生型的，通过基因改造改良了很多性状。其
中不少是通过噬菌体转染的手段整合到大肠杆菌基因组的。比方说名字含有DE3的菌株
，就是溶源性整合了λ-DE3噬菌体，用于表达T7 RNA polymerase。溶源性噬菌体一般
不会裂解，而是随宿主细胞一起复制。但是极少数情况下会产生自发裂解或者诱发裂解
。我上次碰到的情况是和培养箱温度有关，有可能是培养箱温度过高诱发了噬菌体裂解
，但是其他的一些极端条件也可能会是裂解的诱因。
大部分情况下溶源性噬菌体被诱发裂解是因为宿主细胞遇到了不利的生存条件，我觉得
在你的情况下，会不会有可能是因为minimal培养基营养不够？你试试改改培养基的配
方看？不过我上次在买了新的感受态细胞重新转化之后，对温度也不敏感了，所以也许
换一个新的strain也有用。 |
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W*********n
发帖数: 775 | 27 最近要做一个质谱实验，目的是检测一个信号转导通路上的蛋白被抑制剂抑制（没有抑
制的作为对照组），病原体感染后某个器官的蛋白水平变化, 当然很希望能够看到磷酸
化蛋白的变化。
这个器官是单层细胞的，几个平方毫米大小（取50个左右的个体作为一个样品）；
我的初步实验步骤是：器官细胞在裂解液中裂解---沉淀蛋白--凝胶电泳蛋白---胶上用
胰蛋白酶分解蛋白并收集--MS 分析。
请教做过的朋友：
1）用什么溶液和方法来进行器官细胞裂解能够充分裂解细胞，又能够不影响后面的质
谱分析？
2）在裂解完细胞后，用氯仿甲醇沉淀的方法纯化蛋白两次，并除去裂解液中一些盐和
去垢剂；请问这步操作会不会造成蛋白降解，尤其是磷酸化基团的去磷酸化？
2）质谱一般的上样量为多少？ 每个样品要多少ug, 才能够得到比较理想的检测结果？
20ug蛋白一般需要多少胰蛋白酶来降解？
3）大家一般会加入什么样的磷酸酶抑制剂来抑制磷酸化？
谢谢! |
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发帖数: 1 | 28 2018年11月4日凌晨3点起，泉港区后龙镇上西村及峰前村、峰尾镇区域空气出现异味，
并随着风向及风速飘移在主城区一带扩散，引起群众投诉反映。碳九有两种类型，危害
相差大，泉港泄漏的是裂解碳九，危害相对较小。
这个被称为“长寿之乡”的城市饱受化工围城之苦。福建省委巡视后3年，2018年9月底
，在福建省对外公开的中央环境保护督察整改情况中，泉港石化园区安全控制区搬迁工
作进展依然很小，只有53.3%。
泉港碳九泄漏事件后的第四天，2018年11月8日，根据泉州市政府通报，11月4日，福建
省东港石油化工实业有限公司（以下简称东港石化）执行装船作业时，泄漏的是工业用
裂解碳九化学品。初步认定为一起安全生产责任事故引发的环境污染事件。
碳九有两种类型，危害相差大，裂解碳九是危害相对较小的那种。
11月8日，南方周末记者在现场依然能闻到油漆似的气味，有风时更浓烈。泄漏地点肖
厝码头海域已看不到油污，但有村民称，当地海水3小时会有一次流动循环，“过几个
小时，油花还会漂回来”。这四天里，在泉州市泉港区，愤怒的泉港人一部分选择了逃
离，一部分选择了蹲守。
有泉港人为了躲避受到污染的空气和海产品，... 阅读全帖 |
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p*****3
发帖数: 1331 | 29 天然气(主要成分是甲烷)制乙烯的路线分直接法和间接法两种。相比间接法冗长繁
琐的过程，直接法只需一步即可将甲烷转化成乙烯，具有很高的经济价值，非常具有吸
引力。
化学化工界30多年的努力终于变成现实—储量丰富、价格低廉的天然气可直接转化
为世界上最大宗的化工基础原料乙烯。
近日，美国Siluria技术公司(以下简称Siluria公司)为其在得克萨斯州的试验工厂
举行盛大开车仪式，成为世界上第一家实现将天然气直接工业化大规模转化为乙烯的企
业。新路线或将给传统以石油为原料的乙烯行业带来重大变革。
化学界的“圣杯”
作为基础工业原料，乙烯在石化工业中占有重要地位，乙烯产量是衡量一个国家石
油化工发展水平的重要标志之一。
除北美和中东，世界上包括我国在内的大部分国家和地区以石脑油为原料，采用蒸
汽裂解法制乙烯。该方法不仅耗能高、排放温室气体多、成本高，而且由于原料来自于
石油，还需要挤占宝贵的石油资源。
为减少石油依赖，各国开展以主要成分为甲烷的天然气制烯烃的研究。天然气制乙
烯的路线分直接法和间接法两种。相比间接法冗长烦琐的过程，直接法只需一步即可将
甲烷转化成乙烯，具有很高的经济价值，非... 阅读全帖 |
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k*****a
发帖数: 7110 | 30 正文 阴影谷篇 第八十一节
啃书阁 更新时间:2011-9-10 0:40:20 本章字数:4306
琼恩觉得自己的头有点疼。
他之所以会来到这里，并不是因为莎尔的要求，也不是因为莎琳娜的邀请，当然更
不是为了履行勇者救公主的传统职责——扎瑞尔是不是公主尚属未知，大魔王的身份倒
是确定无疑。琼恩之所以愿意做这件事，原因无他：他需要一个帮手去对付第五秘器，
救出梅菲斯。
梅菲斯现在被困于第五秘器的领域之内，要如何营救，奥嘉莱斯给了琼恩三种解决
方案。第一种是干掉操纵秘器的奇械师，第二种是坚守足够的时间，等到领域自行消散
，第三种则是直接策反奇械师。前两种方法显然难度都比较高，相比较起来，第三种方
法最为轻松省力，似乎应该作为首选考虑。其实琼恩也未尝没有考虑过直接去找凯瑟琳
，请她看在自己份上放梅菲斯一马。虽说他也不知道自己和凯瑟琳到底是什么关系，但
从以往打交道的情形来看，“有很深的渊源”这点至少是可以肯定的，而且是友非敌。
凯瑟琳对梅菲斯的态度明显不是很友善，甚至隐隐敌对，但在蛇炎山时却曾经主动出手
救过梅菲斯，显然也是因为琼恩的缘故。既然如此，... 阅读全帖 |
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k*****a
发帖数: 7110 | 31 正文 阴影谷篇 第八十一节
啃书阁 更新时间:2011-9-10 0:40:20 本章字数:4306
琼恩觉得自己的头有点疼。
他之所以会来到这里，并不是因为莎尔的要求，也不是因为莎琳娜的邀请，当然更
不是为了履行勇者救公主的传统职责——扎瑞尔是不是公主尚属未知，大魔王的身份倒
是确定无疑。琼恩之所以愿意做这件事，原因无他：他需要一个帮手去对付第五秘器，
救出梅菲斯。
梅菲斯现在被困于第五秘器的领域之内，要如何营救，奥嘉莱斯给了琼恩三种解决
方案。第一种是干掉操纵秘器的奇械师，第二种是坚守足够的时间，等到领域自行消散
，第三种则是直接策反奇械师。前两种方法显然难度都比较高，相比较起来，第三种方
法最为轻松省力，似乎应该作为首选考虑。其实琼恩也未尝没有考虑过直接去找凯瑟琳
，请她看在自己份上放梅菲斯一马。虽说他也不知道自己和凯瑟琳到底是什么关系，但
从以往打交道的情形来看，“有很深的渊源”这点至少是可以肯定的，而且是友非敌。
凯瑟琳对梅菲斯的态度明显不是很友善，甚至隐隐敌对，但在蛇炎山时却曾经主动出手
救过梅菲斯，显然也是因为琼恩的缘故。既然如此，... 阅读全帖 |
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l***g
发帖数: 19 | 32 想先做GST-pulldown，然后用pulldown产物电泳银染切胶回收去做MS。问题是，如果我
现在想用细菌中纯化的GST融合蛋白，应该bind多少蛋白到多少的beads上（100ul？）
，然后用HeLa细胞的裂解液来亲和吸附，应该大概用多少HeLa细胞裂解液？我感觉细胞
裂解液少了的话可能结合在GST融合蛋白上的蛋白太少了，在之后洗脱的过程中可能又
损失点，然后在银染的话可能看不出来。如果不用裂解液用动物组织，譬如rat或者
sheep的脑子，大概需要裂解多少克的脑子？多谢！ |
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y**s
发帖数: 6809 | 33 我觉得说黑色液体是超级诱变剂是有道理的.这个片子里交待的很清楚了,它先是碰到了
地上的爬虫,于是爬虫变成了大型的有嘴动物,但此时它的生命周期还是包括卵-幼虫-蛹
-成虫,并且有外骨骼,性和生殖系统也是基于雌雄同体+雄性的构建.
据异性系列的设定来看,诱变剂的作用应该是把dna断裂成reasonable的长度(大概在一
个或几个完整基因的样子),并使幼虫的dna可以和寄主的dna进行高效的重组,从而pick
up寄主的一些基因和dna组合方式,从而发展出寄住的一些性状.比如在牛身上寄生的幼
虫就出现四条腿,在人身上的就呈现直立的身体形式.到异性第四集发展出胎生的生殖方
式.(当然这个比较扯,因为这样的改变是要配合一些社会结构的变化,比如有理论说,雌
雄+雄这种多和eusociality即蚁和蜂的社会结构联系在一起,这种社会结构和人类及其
他哺乳动物的社会结构的区别,反映的是个体的流动性这个参数的差异.等等)
这样的进化在地球历史上took的时间是天文数字,但是在诱变剂的作用下可以在几个生
命周期中完成.
但如果说片头大白喝下的黑水完全就是这个水,就比较奇怪了.因为首先它只能裂解dna
而... 阅读全帖 |
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p*****n
发帖数: 981 | 34 ☆─────────────────────────────────────☆
giantbird05 (大鸟) 于 (Thu Jan 25 20:19:46 2007) 提到:
要裂解几十个T75 FLASK的细胞，然后用抗体把裂解液中的蛋白拉下来。。
裂解液的要几十毫升，我想浓缩一下，但是怕变性影响以后的免疫沉淀。
高手请进，帮我指导一下。
多谢了。
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pigskin (六如) 于 (Thu Jan 25 20:23:50 2007) 提到:
裂解液中的蛋白浓度已经很高了。。。
不好浓缩，而且容易把目标蛋白搞死。
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KingofMS (offer来了，H-1B没了。我苦) 于 (Thu Jan 25 20:24:05 2007) 提到:
columns packed with C4 (based on hydrophobicity)?
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a********e
发帖数: 3771 | 35 最近一次做western，用NEPER kit提取胞浆里的ERK和p38蛋白。因为用划伤组织做刺激
，脱落不少细胞，我就把medium离心得到这些脱落的细胞。同时在培养皿里加冰PBS，
在冰PBS里刮下剩余的细胞放进脱落的细胞里再次离心。然后用kit里CER lysis buffer
裂解（已加入inhibitor cocktail）。
裂解的时候我vortex两次，每次15sec。NEPER protocol要求vortext一次，15sec即可。
结果照片洗出来什么都没有，连EGF刺激的positive control都没出来。
以前只用过一次NEPER，erk出来band，而且结果可信。不同点在于没有收集脱落的细胞。另外，这次实验煮沸变性的时间长了，用了15min。
所以我考虑是不是多次离心、vortex是蛋白降解，也可能是收集脱落细胞的时候medium
和细胞都没有冷却到ice cold，磷酸酶还在起作用。煮沸时间长我不确定会不会对实验有影响。
另外，p38一直没做出来过。用超声裂解细胞也好，用NEPER vortex裂解也好都没出过
band。
请高手指点，同行探讨。谢谢。 |
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W*********n
发帖数: 775 | 36 谢谢艳阳天！请问：
我是从小虫子里面分离小胃，不是细胞，洗一洗的作用是啥啊，更干净一些么？
名
想沉淀一下的目的，一来去掉裂解液中的去垢剂，二来浓缩一下蛋白，把样品全部上上
去（这个样品获取比较麻烦，而且解剖时间不能太长）。你说的裂解8M Urea，就是只
有8M Urea溶解在水中？（我得蛋白基础很薄弱）。而且裂解1mg的单层细胞组织需要多
少ul，什么条件下，多久可以彻底裂解？
你是否觉得沉淀蛋白的过程会对phosphotase 有影响？
我们跑质普的实验室一般对一个样品分跑三个泳道，每个泳道切成三份，再对每份进行
MS 分析，所以一个样品要做9个酶切，我做四个样品就要做36个酶切，酶切收费有点贵
，他说可以train我来做，节约开支。 |
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g*********5
发帖数: 2533 | 37 看的头昏眼花，有这么复杂吗？我的做法
直接用dynal protein G.
裂解细胞（裂解常用的detegent有tritionx100,NP40,chaps)
裂解液的配方要自己摸。看看文献蛋白A 别人用什么条件作ip。
用PBS洗珠子，最后一遍用裂解液洗。
lysate preclear control igG 1 HOUR, 加珠子半小时。
沉淀珠子，抗体和对照igG分别加到lysate中。2小时 ----overnight
加珠子沉淀。
洗珠子3-4次。
loading buffer 煮，100度3min
离心，上样。
包子。 |
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m*******u
发帖数: 30 | 38 这是300万字拙作《道德经新论》第一篇第五章的第二节。有些内容需要结合该篇另外
章节理解（网友如果快速阅读，不清楚之处可以跳过。另外此节的“象”就是“道”）。
论坛排版不便，有兴趣者可下载全书或去博客阅读，链接见文末。
二、老子与粒子物理学比较
1，道（象）与真空、场、以太
1.1 “象”的一些基本情况
1.2 “象”与真空
1.3 “象”与场
1.4 “象”与以太
2，道（“象、物”）、“一、二、三”与基本粒子
2.1 形态与结构——“象、物”与丝弦、点粒子
2.2 形态与结构——“一、二、三”与丝弦、点粒子
2.3 “一、二、三”与基本粒子的一些性征
2.3.1 大小、稳定性、寿命
2.3.2 振荡、旋转、移动、碰撞、运动的永恒性
2.3.3 产生、消亡、转化、统一性
2.3.4 质量、能量、质能守恒、质能关系、连续性、量子化
2.3.5 波粒二象性、不确定原理
3，“象”与四种相互作用、统一理论、统一场、波动与传播
3.1 强、弱相互作用
3.2 电磁相互作用与电磁波
3.3 引力相互作用与引力波
3.4 统一理论
4，“物、一、二、三”与基本粒... 阅读全帖 |
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F*D
发帖数: 361 | 39 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: controlitok (粗鄙无文的工科生), 信区: Military
标 题: 全球首支甲流疫苗获批生产(图)
发信站: BBS 未名空间站 (Thu Sep 3 20:39:46 2009, 美东)
核心提示：国家食品药品监督管理局昨天宣布，批准北京科兴甲型H1N1流感疫苗注册申
请，这是全球首支获准生产并投入使用的甲流疫苗。该公司保证“十一”前生产出500
万人份的用量，全部用于国家储备，暂不面向个人接种。
9月3日，北京科兴的工作人员在展示甲型H1N1流感病毒裂解疫苗。
9月3日，北京科兴的工作人员在生产甲型H1N1流感病毒裂解疫苗。
9月3日，北京科兴的工作人员在分装甲型H1N1流感病毒裂解疫苗。
北京日报9月4日报道 国家食品药品监督管理局昨天宣布，批准北京科兴甲型H1N1流感
疫苗注册申请，这是全球首支获准生产并投入使用的甲流疫苗。北京科兴生物制品有限
公司表示，保证“十一”前生产出500万人份的用量，全部用于国家储备，暂不面向个
人接种。目前北京地区相关单位已经订下500万支的采购单。
全过程仅用87天 |
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d******0
发帖数: 471 | 40 http://wenews.nownews.com/news/2/news_2993.htm
台灣最「輕」的重工業－輕油裂解廠 從一數到八
一根根的大煙囪直指天際，吐出陣陣的白煙，周圍工廠林立，砂石車與油罐車魚貫進出
。這是台灣的石化工業園區，為整個石化工業帶來所需的原料，而輕油裂解廠，是其中
最基本的設備。從一輕（第一套輕油裂解廠）到正在計畫建設的八輕，每年總共為台灣
帶來數百億的稅金收入，也同樣帶來無法估計的環境污染。
石化上游原料的提供者
一輕於民國五十七年開始完成運轉，目的在於利用高溫，將輕油經過分離程序後取
得乙烯、丙烯、丁二烯、芳香烴等一系列石化原料，以提供石化工業的中下游廠商使用
。之後中油又陸續在高雄興建二、三、四、五輕，由民營公司台塑所設的「六輕」則是
在雲林縣麥寮鄉設廠。台塑麥寮廠吳經理表示，人類的食衣住行，都需要用到這些石化
原料，是台灣製造業重要的原料來源。
全島環保反「輕」
民國七十六年，高雄後勁居民展開了「反五輕運動」，反對中油在自己的家鄉設立
五輕，從此引發了台灣長達30幾年的反「輕」運動 |
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g**1
发帖数: 10330 | 41 兩岸雙方產業移轉不能「一邊倒」
2011-09-03 工商時報 【本報訊】
台灣多家石化企業日前在產業公會理事長率領下，和大陸方面簽署合作意向書，
擬合資150億美元，在福建漳州古雷半島投資「台灣石化專區」，其中包括我方尚未開
放登陸投資的輕油裂解項目。這訊息顯示，大陸對台灣產業的「磁吸效應」，已穿透到
我方產業體系最根本的層面，並有導發「整套產業鏈移轉」的傾向。對此，我方執政當
局需有一套妥善的因應對策。
近幾年來，我方開放廠商登陸投資的類項，如同「剝竹筍」一樣，從較粗陋的「
外殼」性項目，一直往較精細、較具科技成分的「核心」性項目開放。如IC晶圓製程之
從大微米向小微米開放，顯示器面板從舊世代向新世代開放等，不一而足。而這次躍上
檯面的石化輕油裂解，亦是該產業最關鍵的部位。雖然我方當局目前基於2012年大選選
情因素等考量，很可能會對輕油裂解西移之壓力「頂住」於一時，但顯然無法長期不開
放。
其實產業西移「步步深化」現象產生的原因，是「形勢比人強」。因為大陸有市
場優勢，還有逐步崛起的技術人力優勢，以致於台灣產業界，不得不把產業鏈的核心部
份也漸次搬過... 阅读全帖 |
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w*********g
发帖数: 30882 | 42 我国突破天然气制备乙烯瓶颈甲烷可高效转化 被认为将改变世界
字号:小中大
2014-05-13 12:11:52
更多
371
关键字 >> 天然气甲烷石油化石能源页岩气甲烷转化甲烷无氧活化乙烯基础化学品乙烯
装置头条中国基础研究观察者头条
“即将改变世界的新技术”——全球著名化工企业巴斯夫集团副总裁穆勒对中科院大连
化学物理研究所的一项最新成果给予了高度评价。5月9日，美国《科学》杂志发表了该
研究所包信和院士团队在甲烷高效转化相关研究中获重大的突破。这一研究实现了甲烷
高效生产乙烯、芳烃和氢气等化学品。
乙烯、PX等石化产品是现代工业最重要的原材料之一，乙烯更是被视为一个国家工业发
展水平的重要标志。此前乙烯多由石油裂解获得，而从甲烷制备乙烯的工艺路线，至今
仍被视为化学领域的“圣杯”。据悉，中国目前乙烯产量居世界第二，但仍然远远落后
于美国，而我国对聚乙烯等下游产品的需求量已经赶超美国，这对中国的能源安全提出
了巨大挑战。有了上述新技术，未来我国将可用储量远大于石油的天然气、页岩气高效
生产乙烯。
我国突破天然气制备乙烯瓶颈 被认为将改变世界
我国突破天然气制备乙烯瓶颈，巴斯夫总... 阅读全帖 |
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g**1
发帖数: 10330 | 43 【 以下文字转载自 Military 讨论区 】
发信人: gc01 (gc01), 信区: Military
标 题: 湾湾社论：中共十二五产业规划不应伤害台湾利益 ZT
发信站: BBS 未名空间站 (Fri Sep 2 19:16:14 2011, 美东)
兩岸雙方產業移轉不能「一邊倒」
2011-09-03 工商時報 【本報訊】
台灣多家石化企業日前在產業公會理事長率領下，和大陸方面簽署合作意向書，
擬合資150億美元，在福建漳州古雷半島投資「台灣石化專區」，其中包括我方尚未開
放登陸投資的輕油裂解項目。這訊息顯示，大陸對台灣產業的「磁吸效應」，已穿透到
我方產業體系最根本的層面，並有導發「整套產業鏈移轉」的傾向。對此，我方執政當
局需有一套妥善的因應對策。
近幾年來，我方開放廠商登陸投資的類項，如同「剝竹筍」一樣，從較粗陋的「
外殼」性項目，一直往較精細、較具科技成分的「核心」性項目開放。如IC晶圓製程之
從大微米向小微米開放，顯示器面板從舊世代向新世代開放等，不一而足。而這次躍上
檯面的石化輕油裂解，亦是該產業最關鍵的部位。雖然我方當局目前基於201... 阅读全帖 |
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O**l
发帖数: 12923 | 44 你这个跟我说的有区别吗
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七、页岩气开发成功带动美国乙烯装置投资新一轮热潮
北美丰富的非常规天然气资源为普遍使用轻质原料的美国石化生产商提供了充足的
、具有价格优势的原料。2012年乙烷价格的走低令美国乙烯行业盈利表现抢眼，从而刺
激了石化生产商进一步加大了在美的投资力度，同时也提高了当地石化产品的出口竞争
能力。迄今为止，雪佛龙菲利普斯化学、陶氏化学、壳牌、沙索、台塑、埃克森美孚、
西湖化学、伊士曼化学、利安德巴赛尔等都提出了大手笔的裂解装置建设计划。北美新
建乙烯装置项目大部分将在2016~2017年投产。预计2017年前美国乙烯产能将增加29%，
达到3560万吨的历史新高。显然，北美页岩气开发将影响未来5～10年全球乙烯及下游
衍生物的投资格局。2012年计划在美国投建的部分乙烯装置见表4。
表4 2012年计划在美国投建的部分乙烯装置统计
公司名称 2012年宣布的计划
南非沙索公司 2012年2月宣布打算在路易斯安那州查尔斯湖工厂新建
... 阅读全帖 |
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a*******m
发帖数: 14194 | 45 油价下跌的地缘政治和经济影响分析——芝商所
http://www.cmegroup.com/cn-s/education/featured-reports/oil-collapse-winners-and-losers.html
油价下跌的地缘政治和经济影响分析——芝商所
10 Mar 2015 By CME Group and Erik Norland Topics: Interest Rates, FX,
Economic Events, Energy, Metals, Agriculture
油价下跌的地缘政治和经济影响
本报告中的所有示例均为对各类情形的假设性解释，仅作说明用途。本报告中的观点仅
反映作者的观点，不一定代表芝商所或其附属机构的看法。本报告及当中信息不应被视
为投资建议或实际市场经验的结果。
自2014年6月30日以来，原油价格已几近腰斩（图1）。而且，油价走向依然不明确，未
来几年持续走低的可能性非常大。虽然在努力开发替代能源和节能上取得进展，石油仍
然是世界经济的生命线，也是唯一实质性的运输燃料。因此，油价下跌必将以不同的方
式对全球产生重大的经济和政治影响。... 阅读全帖 |
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T*******4
发帖数: 1406 | 46 谢谢。裂解差对应的英文是crack spread？
[在 sate (blah) 的大作中提到：]
:裂解差就是原油练出来的产品减去原油的成本。这是炼油的利润。你可以自己算，原
油汽油柴油321或者532裂解比列。最简单的你去cme找它的crack spread future。这个
原本是给炼油商对冲用的。当然大部分人还是直接自己合成对冲。 |
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c****t
发帖数: 19049 | 47 654 大难不死
张小强拽着保尔重重地落到地上，巨大的震动让他差点喷出一口鲜血，五脏都在震动中
纠结，嘴里涌出的血腥味儿刺激着他的味蕾，周围全是坠落的碎片与燃烧的零碎，熊熊
大火在两人身边缓缓扩散，浓浓地黑烟将他们与其他的飞机挡开。
保尔已经摔晕过去，看他大腿上刺出来的骨头，便知道这个优秀的飞行员状态很不好，
若是得不到抢救，仅从被骨头撕开的伤口中流出的鲜血，就会要了他的小命。
张小强吐出嘴里的血沫子，将G36步枪挂在颈子上，一手拧着箱子，一手抓住保尔的衣
领，拖着他向前面烧光植被，露出黑色洞口的水井而去，天上的飞机张小强已经管不了
了，
刚才他灵机一动，用鼠王刃击碎了机窗，拽出了保尔，顺便还抢回了箱子，用爆炸的飞
机作为掩护，坠落到地上大难不死已经算得上上天保佑了，也就是他，已经对高空坠落
有了经验，能借用各种东西当做落脚石，要不然现在他和保尔应该和飞机一起变成了焦
尸。
拖着保尔到了枯井，里面没有一滴水，干枯的沙土上染上一层黑色的灰烬，三米高的距
离也不是那么难以逾越，张小强首先扔下了大箱子，随即撕开了保尔的衣领，让他的脖
子没那么拘束，将最后的保命丹喂给了他后，给他重新戴上了飞行... 阅读全帖 |
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c****t
发帖数: 19049 | 48 654 大难不死
张小强拽着保尔重重地落到地上，巨大的震动让他差点喷出一口鲜血，五脏都在震动中
纠结，嘴里涌出的血腥味儿刺激着他的味蕾，周围全是坠落的碎片与燃烧的零碎，熊熊
大火在两人身边缓缓扩散，浓浓地黑烟将他们与其他的飞机挡开。
保尔已经摔晕过去，看他大腿上刺出来的骨头，便知道这个优秀的飞行员状态很不好，
若是得不到抢救，仅从被骨头撕开的伤口中流出的鲜血，就会要了他的小命。
张小强吐出嘴里的血沫子，将G36步枪挂在颈子上，一手拧着箱子，一手抓住保尔的衣
领，拖着他向前面烧光植被，露出黑色洞口的水井而去，天上的飞机张小强已经管不了
了，
刚才他灵机一动，用鼠王刃击碎了机窗，拽出了保尔，顺便还抢回了箱子，用爆炸的飞
机作为掩护，坠落到地上大难不死已经算得上上天保佑了，也就是他，已经对高空坠落
有了经验，能借用各种东西当做落脚石，要不然现在他和保尔应该和飞机一起变成了焦
尸。
拖着保尔到了枯井，里面没有一滴水，干枯的沙土上染上一层黑色的灰烬，三米高的距
离也不是那么难以逾越，张小强首先扔下了大箱子，随即撕开了保尔的衣领，让他的脖
子没那么拘束，将最后的保命丹喂给了他后，给他重新戴上了飞行... 阅读全帖 |
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f*****n
发帖数: 12752 | 49 947 不参与
没人知道剑斩是怎么出来的，之前只有张小强一人站在外面，后来多了一个金星，突然
间多了一个人出现在神血战士中间，让他们全都为之变色，法兰克林看到金发壮汉伸进
裤兜的右手差点哭了出来，哆哆嗦嗦地举起右手，按住手腕上的手表装置高声喊道：
“你们想要叛乱么？都给我蹲下，不然我就启动炸圌弹……。”
剑斩眯着眼睛盯着壮汉，手中的鸟喙只要轻轻一拉就能将这人的头颅拉断，场面凝
重无比，哗啦地雨声成了背景音乐，张小强重重地踏着雨水走来，金星则畏畏缩缩地站
在原地，站在那儿的还有法兰克林，剩下的神血战士看到张小强动了，他们也移动身形
，却在法兰克林地警告声中迟疑，直到张小强站到这人身前。
“我代圌表创世纪向蟑螂哥问好……。”
巨汉开口说话了，标准的普通话，同时点出了张小强的绰号，虽然有金星之前告知
，但是巨汉的样子明显不是第一次听说张小强，随即他慢慢地拿出右手，却是一部精巧
的卫星电圌话，只见电圌话灯光闪烁，处于来电时间，只要摁下接通键，张小强就能与
未知名的对方通话。
“创世纪是个恐怖组圌织，他们在新纪元内部大肆破圌坏，是以反.人类为目的的，他
们的宣称清洗一切zuìè，末圌世的到来是最... 阅读全帖 |
|
f*****n
发帖数: 12752 | 50 950 人形生物
张小强拒绝了血凤的和解，将注意打圌倒了变异兽身上，市区的变异兽种类多样，数量
庞大，既是威胁又是资源，四圌级水蛇是一个样板，只要能提圌供足够的晶核，这些原
本胆子不大的水蛇会成长到惊人的地步，若是张小强手中有一群四圌级水蛇，何至于在
之前纠结成那样？$
在等待护卫舰修理的过程中，每天有两万幸存者和上千吨物资通圌过浮桥在对岸囤
积，有了更多的时间，长江舰队也开始得到喘息，湖北方面已经组圌织第二批运输船过
来，这一次过来的大多是江西那边建造出来的木质帆船，有了这些船，雨水中也不怕损
耗，虽然机动力差一点，还是勉强能缓解运输压力，大批大批被油布包裹的严严实实地
器材与物资通圌过长江送到了武汉，很多年幼的孩子也幸圌运地离开了危险之地，到最
后每一个人都认为前途是光圌明的。$
变异巨兽在不计成本的切割下逐渐被分解，大量的肉食补充到幸存者的食谱中，等
级越高的变异兽对人类的滋补效果越好，进化者在吃了这些肉之后逐渐得到强化，向半
顶尖进化者提升，越来越多的幸存者开始恢复了末圌世消耗的元气。枯瘦的脸颊丰润许
多，色泽也开始红圌润，还有孩子们也得到了营养补充，以前一个个长得像发圌育不良... 阅读全帖 |
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