b*******e
发帖数: 3011 | 1 顺便一个电脑配置，需要保证3D作图软件solidworks2010中大中型装配体的流畅运行。
其他软件如UG NX8.0和AutoCAD2010。想找合适的显卡，相应的其他电脑配置也需要一
个单子。现目前最高配置的也就是E5300 2.6G+Geforce 512M的9800GT，开图很慢。 |
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d***o
发帖数: 304 | 2 子网gateway 全部是192.168.2.1
我用的是Asus RT-N56U 自带firmware几个click 就可以用了。 我看了后台，有个
routing tables。
Destination Gateway Genmask Flags Metric Ref Use
Iface
192.168.1.1 * 255.255.255.255 UH 0 0 0 WAN
239.255.255.250 * 255.255.255.255 UH 0 0 0 LAN
192.168.2.0 * 255.255.255.0 U 0 0 0 LAN
192.168.1.0 * 255.255.255.0 U 0 0 0 WAN
default 192.168.1... 阅读全帖 |
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w*s
发帖数: 7227 | 3 问个傻问题，pc2的netstat是这样，
10.50.180.0 * 255.255.252.0 U 0 0 0 eth0
default 10.50.183.254 0.0.0.0 UG 0 0 0 eth0
这里*是什么意思？
10.50.18.0这一类地址在自己的network里，不需要gateway就可以直接通过
switch连接到？比如pc1？
如果我从pc2去www.yahoo.com，那才需要第二行的10.50.183.254，从那里访问外部网
络。
我的背景是写c程序，炒股票和打餐馆，对网络不通。
谢谢各位大侠！ |
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w*s
发帖数: 7227 | 4 so eth0 and eth1 ate up after reboot,
i unplug eth1,
from host i can still ping eth1.
Kernel IP routing table
Destination Gateway Genmask Flags Metric Ref Use Iface
10.50.180.0 * 255.255.252.0 U 0 0 0 eth0
10.50.180.0 * 255.255.252.0 U 0 0 0 eth1
default 10.50.183.254 0.0.0.0 UG 0 0 0 eth0
is this legal ? |
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w*s
发帖数: 7227 | 5 hi i have eth0 and eth1,both static ip.
eth0 is not plugged in initially.
# route -n
Kernel IP routing table
Destination Gateway Genmask Flags Metric Ref Use
Iface
0.0.0.0 10.50.183.254 0.0.0.0 UG 0 0 0 eth1
10.50.180.0 0.0.0.0 255.255.252.0 U 0 0 0 eth1
then i plugin eth0,
#route add default gw 10.50.183.254 eth0
#route: SIOCADDRT: Network is unreachable
how should i fix it ?
thanks ! |
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s******g
发帖数: 52 | 6 route -n
destination gateway Genmask flags Metric Ref Use Iface
0.0.0.0 192.168.1.1 0.0.0.0 UG 0 0 0 wlan0
192.168.1.0 0.0.0.0 255.255.255.0 U 9 0 0 wlan0
thanks for any hints. |
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T********r
发帖数: 6210 | 9 ate: Tue, 28 Jun 2005 01:11:58 +0200
From: Przemyslaw Frasunek
To: f*************[email protected], b*****[email protected]
Subject: Solaris 9/10 ld.so fun
[ The following text is in the "ISO-8859-2" character set. ]
[ Your display is set for the "hz-gb-2312" character set. ]
[ Some characters may be displayed incorrectly. ]
ld.so from Solaris 9 and 10 doesn't check LD_AUDIT environment variable when
running s[ug]id binaries, allowing to run arbitrary |
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b******n
发帖数: 14 | 11 Hey guys:
I have just got two offers from following two schools:
Acct @ Virginia Commonwealth University (assistantship), University of North
Texas (fellowship)
Which one is better?
Background:
GRE: ~1500
UG GPA: 3.4+, Grad GPA: 3.8+
T Waive
Thanks. |
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k*****r
发帖数: 1435 | 13 explanatory和learnable没有一定关系吧，虽然传统说法里unlearnable的一定都是
competence的一部分（他们的逻辑是－否则从哪里来的，呵呵），但是learnable里的
东西也有可能是competence。所谓learnable只是input里有negative evidence，但是
不代表小孩一定是从input里学到这些的。
unlearnable的东西是UG存在的最强证据，所以这么多人才这么重视这个。
感觉所有搞句法一般都不管那些principle和derivation怎么进入人大脑的，先假设在
那里，也许将来再回来研究为什么。这没有什么错误，如果逆转过来先研究大脑机能不
一定能推导出合理的语言机制。
还有－－processing研究的是performance吧。我是绝对赞成把performance和
competence分开的，研究清楚各自之后当然可以研究他们的interaction，但是句法系
统首先需要完全基于competence的理论。 |
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r****n
发帖数: 4 | 14 Good point!
I am sure that the precipition was caused by potassium ions which complex with
SDS and become insoluble. You should remove potassium ions from your SDS
extraction solution by using sodium salt.
I do think your protein concentration is too high because I even used much
higher protein concentration for my protein 2d electrophoresis. But for
SDS-PAGE, you can not load too much protein even with a concentrated sample.
You still have to dilute your sample. I usually load 20-30 ug for my |
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p****p
发帖数: 3360 | 15 Check out the Maxi Prep protocol from Sambrook's Molecular Cloning. If I
remember correctly, it should be 170 ug/ml final O/N.
culture |
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h******y
发帖数: 1374 | 16 loading volume should depend on the thickness of the gel, right?
ug |
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e****s
发帖数: 1125 | 17 一般是5ug左右就好了，和体积没啥关系。
ug |
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s****l
发帖数: 395 | 18 这问题太tricky了,我以前都load好多(20ug),可以看到很多杂拌,但是主band太明显了(
已经饱和了),结果被committee批评说提蛋白水平太差,蛋白太不纯.
结果我就老实了,按照paper上别人load的强度,同样的sample,我load 1ug后就剩下1条
主band,然后大家都很开心的说蛋白很纯一条带. 所以我觉得最好做个梯度, 从0.5ug到
20ug, 自己清楚一个purity,给别人show另一个purity.
ug |
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T**********t
发帖数: 1604 | 19 看了一下Qiagen网上的faq，好像不行，虽然没提MinElute，可是估计道理一样的：
Are QIAprep and QIAquick Spin columns interchangeable?
No. While columns from the QIAprep Spin Miniprep Kit and the QIAquick PCR
Purification- and Gel Extraction Kits are based on silica-gel-membrane
technology, each is designed to work optimally within its own kit format. In
addition, the binding capacity and DNA recovery size cut-offs of the
QIAprep and QIAquick Spin columns are different. QIAprep Spin columns bind
up to 20 ug of plasmid DNA up to |
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m****m
发帖数: 395 | 20 有没有有经验的啊？
1ul的样品，加1*SB至20ul后全部加入胶孔，最后条带亮度中等，也就是，
marker上了3ul，比marker的那个条带要亮1倍左右。
估计我这1ul的样品里有多少ug蛋白呢？
样品总共700ul，我想知道这700ul里有多少mg的蛋白。 |
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c**n
发帖数: 73 | 21
examine the effect of host-defense.
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~```
depends on specific cell types your receptor is expressed on
you need much less if you are targeting circulating cell by i.v
depends on the first question.
if i.v., I would say 60-80 ug would be a good dose to start with.
It also depends on the antibody though.
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~
depends on the nature of your experiment
Chronic or acute
~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~`
check anything that |
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C*****h
发帖数: 926 | 22 用lipofectamine 2000转染3T3细胞，但是transfection效率太低（不到1％），
不知道是怎么回事？
0.8 ug plasmid DNA + 2 ul lipofectamine
转染1x10^5细胞。
不知道大家是怎么检测shRNA的knockdown的效果？
我是把带有shRNA的plasmid，转染到3T3细胞，然后用western blot检测蛋白质，
看目标蛋白是不是减少了。
可是现在转染效率不到1％，就算shRNA把那1％的细胞内的目标蛋白全部knockdown，
总个western blot还剩下99％的蛋白质。
有什么办法提高3T3细胞的转染率？有人转染过这个细胞系吗？请帮忙指教一下。谢谢。 |
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C*****h
发帖数: 926 | 23 请看附件上的照片（200x），不知道有多少细胞被转染了？
有没有20％？~100％ confluency
0.8 ug Plasmid DNA + 4 ul Lipofectamine 2000
转染10^5细胞。
谢。 |
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m****m
发帖数: 395 | 25 我用了 100 ug/mL 。。。
20ug/mL就够了吗？ |
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z********i
发帖数: 610 | 26 没有接触过virus infection。
转染后24小时换液，24后收virus（2ml)，因为没有超速离心机，所以没法浓缩。测试
的时候用hela，60mmdish +200ulvirus,通过GFP判断infection效率相当高。
然后用1ml/well virus 感染mouse ES cell（6 well)，发现根本没有GFP
pgk promoter，6 ug/ml polybrene
不知道那位大侠能给点意见？
谢了先 |
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w******e
发帖数: 1187 | 27 有没有什么宝典推荐阅读？
我要做的实验，希望能conjugate a few ug protein to beads (dynabeads, etc)。
要求是用量越少越好（protein贵啊～），在此前提下beads coverage越高越好，
有什么product可以推荐？conjugation完成后如何定量？lab里用nanoorange，据说
效果很一般。
最后，lab用NHS-EDC link primary amine，有什么alternative吗？我指link蛋白
上其他位点。
非常感谢！ |
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s*****3
发帖数: 41 | 28 I just read this article. It seems pretty good.
In the last figure, they compare the neutralization potency and breadth of
the new antibody VRC01 with that of b12, a well-known broadly neutralizing
Ab against CD4 binding site of gp120. Under IC50 <50 ug/ml, VRC01 can
neutralize 91% of 190 Env pseudoviruses, whereas b12 can only neutralize 41%.
One question about the paper is that they design a molecule, RSC3, that
keeps the antigenicity of CD4 binding site of gp120 whereas remove the
antigenicit |
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q**********0
发帖数: 335 | 29 Recenly I use T3 megascript do in vitro transcription. The results is always
bad, the OD260/280 is about 1.53. A big white pellet can be seen after
isopropanol precipitation and RNA concentratin measure is about 1.0 ug/ul.
However, when run a RNA gel, the band is very faint even using 5 uL. I don't
know why? Maybe there is protein contamination? or RNAse digestion? Please
help. Thanks a lot! |
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x**********o
发帖数: 128 | 31 曾经我要订1mg的pepetide,老板发信问了一堆实验设计的问题。后来回信说能不能订
1ug.faint, I don't know if there is any company that can sell peptide using
ug as a unit. |
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A*******e
发帖数: 284 | 32 我大约在200ul体系里面加了几十ug的质粒，按理不算多了。
我也这么想的，在中间克隆一个2-3kb的片断进去，再利用分子量的差异回收。理论上
可行，但实际操作上还有困难，因为没有切开的质粒电泳是不按线性质粒规律的，跑得
要快一点，说不定也就赶上切开的质粒了 |
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s********n
发帖数: 2939 | 33 以前只是做克隆，怎么折腾总能出要的东东。但现在做库的话就需要十分小心，我的制
备的vector几乎没有background，但链接效率不高，最终只能拿到1E7/ug vector。希
望能介绍一些提高链接效率的方法。 |
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x*****e
发帖数: 309 | 34 看来做酶切的人还不少。其实双酶切分两步应该可行，先用对酶切要求比较高（查NEB
附录上需要保护碱基较多的酶）的酶切，反应完后加直接加第二个酶切：不用回收DNA
。这里有人问buffer不同怎么办的问题，查查哪里不同，一般也就是NaCl浓度差异，缺
啥补啥，自己加点调成第二个酶用的buffer就可以了。我现在空质粒双酶切完直接乙醇
沉淀回收（小片段沉淀不下来？）：加2倍体积无水乙醇，可选加1/10体积3M醋酸钠，-
20度大于20分钟，14000rpm*15min回收DNA,70% 乙醇洗2遍，风干后10-20ul水溶解（1-
2 ug DNA），如果有大的插入片段就走胶回收吧。 |
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h******a
发帖数: 712 | 35 有同事建议我去查data sheet of the reagent. 我用的是 BD bioscience 的，根据它
的数据，是0.3～3.3x10^8 U/ml
(range很大），那就应该是30～330 U/ng, 这样推算对吗？
mL. |
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O******e
发帖数: 4845 | 36 那看来我们两个说的 unit不一样。你根据这个unit/ml和分子量就可以算出你要的值
了。
不理解你为什么要算这个。活性才是最重要的数据。 |
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w***e
发帖数: 269 | 37 Call the company. Ask them. |
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m**i
发帖数: 47 | 38 多谢多谢。
我也想过用胶。 如果我需要处理10mg的DNA, 怎么能把这么大量的DNA跑上胶然后提出
来呢？我以前只用过kit处理个几ug. |
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m*********s
发帖数: 1188 | 39 这个检测是可以的, 只是蛋白浓度不能太低, ug/mL以上吧..低了看不出来.. 检测个
30k以上的蛋白是可行的..象BSA的话很容易测出来..动态光散射...
关于贵的问题, 我想我买柱子自己灌行不? 我的样品少, 一次不到0.1mg...柱子有个
10cm长足够了, 就让溶液靠重力慢慢流好了, 费个半小时也就搞定....不过这样的话,
装柱子的管子该去哪里买呢? 不知道那玩意叫啥名字.... |
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m**z
发帖数: 787 | 40 Light scattering should work as well. It is just not a common method for
protein detection after chromatography.....
这个检测是可以的, 只是蛋白浓度不能太低, ug/mL以上吧..低了看不出来.. 检测个
30k以上的蛋白是可行的..象BSA的话很容易测出来..动态光散射...
关于贵的问题, 我想我买柱子自己灌行不? 我的样品少, 一次不到0.1mg...柱子有个
10cm长足够了, 就让溶液靠重力慢慢流好了, 费个半小时也就搞定....不过这样的话,
装柱子的管子该去哪里买呢? 不知道那玩意叫啥名字.... |
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w******e
发帖数: 1187 | 42 多谢建议。我试过up to 1% triton，没效果。。。
我就是label的RNA。cts是指scintillation counts？我的远超过这个了。不过我要
测Kd，起码要用a few ug/ml protein，这时library已经跟protein打得火热了。。。 |
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d*****u
发帖数: 17243 | 43 哈，我正好学过这些
首先，neurolinguistics的实验和结论之间通常都有huge gap
不要轻易相信那些研究者的推论（虽然他们自己可能相信）
Broca's area跟语言的production直接相关，
这个区坏掉的人没法说话，但是基本能理解别人的话
在做一些跟语言有关的实验的时候，这个区也比较活跃
UG是chomsky等学者搞出来的，代表人天生的语言能力
他们认为自然语言的语法复杂度很高，单单靠日常语言输入是无法学会的
这个有数学上的证明，可以参考Gold's theorem
但是这个理论本身也包含了一系列假设
这些假设是否成立有一定争议
比如现在有人说语法复杂度实际没那么高
也有的人说语言习得的过程并非像chomsky等人所想的那样
奇。
activity变 |
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b*****l
发帖数: 9499 | 44 呃。。。有些糊涂。。。 agonist/antagonist 是针对模拟一种 ligand 的 analog/dr
ug 呢，还是指针对一个 signaling event，还是针对一种 bio-function？
我过去一直理解为，能跟某种 ligand 的 receptor binding 的东西，如果跟这种 li
gand 引起的作用相同，并且作用的程度类似或者更高的，叫 agonist；如果 binding
但不引起后续的 signaling events 的，也就是说，block 了 receptor 的，甚至引起
相反的作用的，叫做 antagonist；能引起类似的效果，但是不如 ligand 有效的，叫做
semi-agonist，又因为这种 semi-agonist drug 和 ligand 竞争在 receptor 上的 b
inding site，如果 ligand 过量而 receptor 不足时，或者这种 drug 的 affinity 高
到严重阻碍 ligand/receptor binding 时，这种竞争就会导致 signal 减弱，所以这时
这种... 阅读全帖 |
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w******e
发帖数: 1187 | 45 OD280 0.3 means ～0.3 ug/ul right? I think it's enough for lavapep/
nanoorange |
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